光學(xué)上有種丁達(dá)爾現(xiàn)象：細(xì)微顆粒在強(qiáng)光的直射下，不能為人眼所見(jiàn)，這是因?yàn)楣饩€過(guò)強(qiáng)及繞射現(xiàn)象等因素所造成；把光線斜射，風(fēng)由于光的強(qiáng)烈反射或衍射結(jié)果，細(xì)微顆粒似乎增大了體枳而被人眼所見(jiàn)。這就像平常室內(nèi)本有許多灰塵飛揚(yáng)，可我們看不見(jiàn)，但在暗的房?jī)?nèi)有一束光線（太陽(yáng)光或強(qiáng)烈的燈光）從門(mén)狹縫中斜射進(jìn)來(lái)，微塵就可見(jiàn)了，所謂暗視野照明就是類(lèi)似情況。

    暗視野顯微鏡能觀察到在通常明場(chǎng)視野下看不到的微細(xì)物體,其分辨率可為0.2～0.004 um,因此暗視野顯微術(shù)也可稱(chēng)“超顯微術(shù)”。暗視野顯微鏡與明視場(chǎng)顯微鏡結(jié)構(gòu)上的不同主要在于聚光鏡，并且其物鏡的NA值一般也較小,這樣是為了使照明的光線不直接進(jìn)入物鏡,而造成了暗視野。強(qiáng)大的光線照射在標(biāo)本上,標(biāo)本遇光線發(fā)生反射或散射(衍射)，散射的光投入物鏡內(nèi)，而被人所觀察。由于是利用被檢物體的表面散射光來(lái)觀察物體，所以通常情況只能看到物體的存在和運(yùn)動(dòng),而看不清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)(非均質(zhì)或加方位光闌等情況除外)。暗視野聚光鏡種類(lèi)很多,生物學(xué)上常用的是拋物面暗場(chǎng)聚光鏡，還有心形面聚光鏡,明暗兩用聚光鏡、輝光聚光鏡、同心球面聚光鏡。

    暗視野顯微鏡在鏡檢中,最忌載玻片、蓋玻片不潔或有疵痕,這樣會(huì)造成亂反射干擾。載玻片厚應(yīng)在0.7~1.7 mm內(nèi),另外,無(wú)論干燥系或油浸系物鏡,鏡檢時(shí)應(yīng)在聚光器和載玻片之間加一滴香柏油,以免光線全反射而不能到達(dá)被檢物體上,物鏡與蓋玻片之間不能放油,否則會(huì)變成明視場(chǎng)。此外,物鏡NA值選用不合適也會(huì)變成明視野，NA值應(yīng)為1以下，聚光器，物鏡，目鏡的光軸也需嚴(yán)格地在一直線上，并選用強(qiáng)光源作照明。