熒光顯微鏡光源的職能是提供光，其波長應(yīng)與熒光體的最大激發(fā)波長相適應(yīng),目前實用的光源包括燈、濾光系統(tǒng)和用于聚焦光線的聚光系統(tǒng)。燈和濾光片均影響光線強度、光線波長和光線的光譜純度。

    Kohle 的實驗認為需要純正的紫外光（UV）才能激發(fā)熒光,所以需要使用碳弧燈。碳弧光含紫外光量很高,使用過程并不方便，同時燃燒中產(chǎn)生的臭氧(O₃)含量很高,所以目很少使用碳弧燈作為顯微鏡光源。一般多使用高壓汞弧燈、亞弧燈和鹵素鎢燈作為熒光顯微鏡光源。后來認識到從紫光到綠光范圍的較長波長均可用作激發(fā)光。使用較長波長可免除UV對石英光學(xué)系統(tǒng)的特殊要求。

    現(xiàn)代大型熒光顯微鏡都配有高壓或超高壓充氣弧光燈管。燈管管壁是紫外線透光度高的石英質(zhì)料管球，官球內(nèi)充滿5～10個大氣壓的汞、氙或氫蒸氣和少量氖氣。管球內(nèi)電極的正極為鈍頭形狀的鎢棒,負極為呈尖錐形的鈰鎢合金。當(dāng)燈管在使用過程中管壁變黑阻擋紫外光時,必須更換燈管。

    汞弧燈有三種功率:200W、100W和50 W。其中200 W燈(如 HBO200)是第一個被廣泛接受的弧光燈,并仍廣為應(yīng)用,相應(yīng)的100W燈具有很小的電弧,光強度高,適用于落射照明系統(tǒng),但其供電器遠較HBO200昂貴,50W燈由于其相對價廉,對大多數(shù)工作來說其亮度比較令人滿意,所以很普 及。汞弧燈將其絕大部分能量用于發(fā)射特殊的波長(汞譜線),這樣適于熒光激發(fā)選擇。

    新燈第一次點燃時,應(yīng)接通電流幾個小時,在此期間,電弧的位置將趨于穩(wěn)定,以后使用時,其閃爍將減至最小限度。燈的壽命部分取決于開關(guān)的次數(shù),所以開關(guān)燈次數(shù)應(yīng)少,單次照明時間長比多次短時使用更為經(jīng)濟。一般推薦將一個散熱器固定于弧光燈的上端,而不允許將燈置于強通風(fēng)裝置內(nèi)。當(dāng)燈泡老化時,燈泡里將產(chǎn)生一層金屬鍍膜(從電極而來),從而減小其光線強度。通常當(dāng)電弧的圖像不清晰,或光線太暗而不能滿足需要,或光線出現(xiàn)劇烈閃爍時,均應(yīng)更換燈泡。

    缸燈具有實用的連續(xù)光譜,較適用于那些與汞燈光線波長相重疊的熒光素,如FITC。

    鹵(素)鎢燈主要用于免疫熒光,由于有了低功率汞弧系統(tǒng),且鹵(素)鎢燈用于熒光顯微鏡的亮度不夠,因而使用不多。

    熒光顯微鏡的光源燈管的種類、型號、規(guī)格很多,圖4-6至圖4-9中展示的是高壓汞燈、高壓氙、鹵鎢燈(白熾燈)的發(fā)光波長曲線。

    高壓汞燈 HBO100、HBO50的光源中以波長380 nm、449 nm、550nm、600nm的譜線為主,還含有少量紅外線,高壓汞燈的發(fā)射光譜中的各譜線的高峰都很尖銳。高壓氙燈的發(fā)射光譜中幾乎所有日光光譜都俱全,但發(fā)射曲線的峰值不高,從發(fā)射光譜波長曲線的對比中,看出高壓汞燈是較為理想的熒光顯微鏡光源。

    高壓氙燈的優(yōu)點是光通量、輝度都很高,使用壽命很長。

     如果說汞燈光源光譜曲線具有原子光譜的線性特征,那么氙燈光源光譜曲線有類似分子光譜的帶狀曲線的特征,鹵鎢光源僅是連續(xù)光譜曲線。

從列舉的物理參數(shù)可以肯定，目前所有熒光光源中高壓汞燈，尤其是超高壓汞燈應(yīng)推為熒光光源之首。但是不論高壓汞燈，還是高壓氙燈，從他們的光譜曲線和相對能量分布曲線來看，作為熒光顯微鏡光源必須加阻熱濾光片借以阻執(zhí)擋熱輻射，同時必須使用高質(zhì)量的激發(fā)濾色片吸收無用譜線和干擾譜線。