焦深（depth of focus）又稱垂直鑒別率或景深,是指物鏡對高低不平的物體能清晰分辨的能力，它與物鏡的數值孔徑成反比,物鏡的數值孔徑越大,其焦深越小。在物鏡的數值孔徑特別大的情況下，顯微鏡可以有很好的分辨率,但焦深很小。對于金相顯微鏡來說在高倍放大時，其焦深很小,幾乎是一個平面。這也是把金相試樣制備成平坦表面的緣故，當顯微鏡用于高倍觀察時，由于焦深小,只有在金相試樣表面高低差較小時,才能清晰成像。因此,高倍觀察所用的試樣應淺浸蝕。

顯微鏡焦深D的計算公式為:

D=K*n/M*NA

式中K——常數.約為240um;

n————被檢物體周圍介質的折射率;

M——總放大率;

N——物鏡的數值孔徑。

由公式可知:

(1)焦深與總放大倍率及物鏡的數值孔徑值成反比，可見放大倍率愈高,數值孔徑值愈大，焦深D則愈小。

(2）焦深與分辨率相反，分辨率高則焦深變小。因此,在使用高倍物鏡并在高分辨率下觀察時，由于焦深小，必須運用細調焦裝置上下調節(jié)，以觀察被檢物體的全層,彌補焦深小的缺陷，但具在進行顯微攝影時，則應當盡量利用焦深大的物鏡。如40×物鏡,數值孔徑有0.65.0.70，0.85，0.95四種類型,觀察時，選用NA為0.95的物鏡,可得到好的觀察效果,而顯微攝影時可根據樣品的組織情況適當選用NA值小的物鏡,才能得到比前者焦深大的效果