對于高性能濾光片,應(yīng)該是頻幅選擇性范圍窄、光譜特異性強才能達到熒光光度分析的高水平的需求，這種性能若是用光學(xué)物理量表示的話,就是半波峰寬度和透光度的數(shù)據(jù)。以Leitz 公司的兩張綠色濾光片為例來比較這些物理量的具體參數(shù),圖1所示的綠色玻璃濾光片的波長范圍為400～600 nm,透光度為60%,半波峰寬度為80 nm。從透射曲線的波峰的中腰部(1/2高度)向X軸(波長)引兩條垂直線,兩線間的寬度就是半波峰寬度,它能準確地反映出濾光片的選擇性波長的質(zhì)量。

        圖2所示為綠色干涉濾光片的透添射曲線，這種濾光片的波長選擇范圍為480~520 nm，透光度為60%，半波峰高度（HBW）為20 nm.從兩張透射曲線圖可以看出，同樣是綠色濾光片，透光度都是60%的條件下，后者的半波峰寬度僅為20nm,其相對能量幾乎集中在500nm處的很窄范圍內(nèi)，證明綠色干涉濾光片是窄頻譜、短波長、光譜特異性很強的高性能濾光片。

          用熒光顯微技術(shù)在觀察受激而發(fā)光不強的樣本時，往往需要給予最強光源才能得到所需的熒光效應(yīng)。為此需要最強激發(fā)高性能寬頻譜干涉渺濾光片，這些濾光片所透射的波長范圍內(nèi)熒光效應(yīng)最清楚。熒光素能否激發(fā)出最強、最鮮艷的熒光，最關(guān)鍵的因素就是正確選配與每一種熒光素相匹配的濾光片組。

        要掌握每種熒光素所發(fā)射的熒光光譜波峰，才能正確應(yīng)用濾光片的特征性激發(fā)光譜波峰、阻擋光譜波峰和分色光譜波峰。例如異硫氰酸熒光素的激發(fā)光光譜波峰在490nm,而發(fā)射熒光的波峰在525 nm,二者之間只有35 nm之差(見圖4)。

為了得到異硫氰酸熒光素最強最鮮艷的熒光效應(yīng),就應(yīng)當選擇一個透射光譜的波段為450～490 nm 的藍色激發(fā)片或激發(fā)濾光片組,對應(yīng)這種激發(fā)片應(yīng)選擇一個LP515長波阻擋濾光片,再附加一個截止點為510 nm的色光分離反射濾光片,即能保障激發(fā)光和發(fā)射熒光的波峰分離,這就是說為了得到異硫氰酸熒光素的最佳熒光影像,就要選配LP450＋KP490、RKP510、LP515(見圖4)。