使用方法:
(1)將物料板放在舞臺(tái)上。
(2)打開調(diào)節(jié)器熒光顯微鏡。然后按下啟動(dòng)一套UV燈不能接近15分鐘內(nèi)點(diǎn)燃,后收盤不能重新啟動(dòng)3分鐘。
(3)將激勵(lì)濾波器轉(zhuǎn)換為V,將分色器調(diào)整為V,選擇495或475nm阻塞濾波器。
(4)使用uvfl40、uvfl100螢光鏡檢查。
(5)將非熒光油加入到載玻片上,首先使用40X,然后用100X聚焦顯微鏡檢測(cè)熒光。
(7)由于在由隨時(shí)間推移的UV熒光增加照射熒光物質(zhì)逐漸減弱,因此應(yīng)不斷變化的視野檢查。
(8)紫外FL10或紫外FL20也可用作低倍顯微鏡材料(使用低倍顯微鏡時(shí)不加熒光油)。
熒光圖像的記錄方法:
熒光顯微鏡觀察到的熒光圖像具有形態(tài)特征,具有熒光顏色和亮度。在判斷結(jié)果時(shí),必須結(jié)合起來作出的判斷。結(jié)果是根據(jù)主觀指標(biāo),即工人的眼睛來記錄的。作為一般的定性觀測(cè),它基本上是的。隨著科技的發(fā)展,客觀指標(biāo)被用來記錄判斷結(jié)果,如使用細(xì)胞分光光度計(jì)、圖像分析儀等儀器。但是,這些文書所記錄的結(jié)果也必須與主觀判斷相結(jié)合。
熒光顯微鏡攝影對(duì)于記錄熒光圖像是非常必要的。由于熒光容易褪色和減弱,因此有必要對(duì)實(shí)時(shí)照相的結(jié)果進(jìn)行記錄。該方法與普通顯微攝影方法基本相同。只需使用高速光敏膜,如ASA 200或以上或24。上面。由于紫外光對(duì)熒光的猝滅效應(yīng)很大,如熒光標(biāo)記物FITC等,在紫外光照射30s時(shí),熒光亮度下降了50%,因此曝光速度太慢,無法捕捉到熒光圖像。一般研究熒光顯微鏡有半自動(dòng)或全自動(dòng)顯微攝影系統(tǒng).
注意事項(xiàng):
(1)嚴(yán)格按照操作說明書的要求制造的熒光顯微鏡,不改變?cè)摮绦颉?br/>
(2)檢查應(yīng)在暗室進(jìn)行。進(jìn)入暗室后,接通電源,點(diǎn)燃超高壓汞燈5-15分鐘。當(dāng)光源發(fā)出強(qiáng)光并穩(wěn)定下來時(shí),眼睛有效適應(yīng)暗室,然后開始觀察標(biāo)本。
(3)為防止紫外線對(duì)眼睛造成損害,調(diào)節(jié)光源時(shí)戴防護(hù)眼鏡。
(4)每次檢查時(shí)間為1~2h,超過90min,超高壓汞燈的發(fā)光強(qiáng)度逐漸降低,熒光降低;紫外線照射3~5分鐘后熒光降低。因此,不超過2~3h。
(5)熒光光學(xué)顯微鏡是有限的壽命,檢查應(yīng)聚焦在試樣上,為了節(jié)省時(shí)間,保護(hù)光源。天熱時(shí),冷卻風(fēng)扇應(yīng)添加,更換燈泡應(yīng)該開始新的記錄時(shí)間。后燈可以點(diǎn)亮,然后熄滅是,受燈充分冷卻。每日數(shù)次,以避免火源。
(6)染色后,熒光會(huì)隨著時(shí)間逐漸減弱。當(dāng)試樣在4℃下存放在聚乙烯塑料袋中時(shí),可延遲熒光衰減時(shí)間,防止密封劑蒸發(fā)。
(7)熒光亮度的確定標(biāo)準(zhǔn):一般分為四個(gè)級(jí)別,即"1"-NO或可見弱熒光。"++"-只能看到明顯可見的熒光。"(+)+"-可見且明亮。